期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
具创新分子结构的更优长效性重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白的表达、制备和特性研究
富岩；杨小楠；魏开华；富俞淞；云文琦；郑博崴；刘丹；于在林
关键词：白蛋白类, 红细胞生成素, CHO细胞, 重组融合蛋白质类
摘要：目的：研究作为药物级别重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白的生产制备工艺；开展详尽的融合蛋白理化特性研究；提出作为长效创新药物的质量基础和技术指标。方法利用基因工程技术构建1个能稳定表达全新分子结构和更优长效性的重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白（rHSA/EPO）的基因工程 CHO细胞株；研究建立悬浮、无血清培养基，批次化、可线性放大的规模化生产工艺，并就分离纯化的融合蛋白进行详尽的理化特性分析。结果获得的 rHSA/EPO蛋白质单体纯度达到97%以上；经不同作用位点蛋白酶水解的 rHSA/EPO产物通过 MALDI-TOF/TOF质谱肽质量指纹谱和 Nano LC-MS/MS液质联用串联质谱检测得到总序列覆盖率100%；N-端氨基酸序列前15个氨基酸与理论序列相符；rHSA/EPO为糖基化蛋白，定位了糖基化位点；原液中融合蛋白的质谱分子量测定值为93 kD；酶深度脱糖后的质谱分子量测定结果为84205 D，与理论分子量84849.52 D值相近；融合蛋白含有1个自由巯基，表明仅有1个游离半胱氨酸存在；经圆二色光谱分析比对表明,HSA和 EPO各自的空间二级构象未变；毛细管电泳测定有多个电荷异构体范围在 pI 5.1~5.8，等电聚焦获得的等电点值（pI）约为 pI 4.9；紫外光谱呈现典型蛋白质光谱特征；原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源性 DNA的残留量均符合药物原料药的要求。免疫学鉴别为阳性；小鼠体内生物比活性测定结果值为0.9×105 IU/mg；体外 UT7细胞法与小鼠体内生物活性测定较大差异，但体内与体外生物活性测定方法可用于不同试验目的，且相互间也具有一定的相关系数。结论理化特性研究获得较为全面的药学数据，其结果可作为指导“注射用重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白（CHO细胞）”原料药的质量标准和制造检定规程的基础，并显示出原创的 rHSA/EPO（之间无连接肽）具有创新性，符合作为药物的更优分子结构要求。
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