期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌细胞中糖原合成酶激酶3β表达的研究
张娜；刘璐；窦玥莹；王真；宋丹青；李电东；邓洪斌
关键词：糖原合成酶激酶3β, RNA干扰, 癌, 肝细胞, siRNA表达载体
摘要：目的构建和筛选能高效、特异性抑制人 GSK-3β基因表达的 siRNA 表达载体，探讨其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法提取人 L02细胞总 RNA，RT-PCR 扩增 GSK-3β基因序列，克隆至 pSEB-HUS 真核表达载体，构建 pSEB-G重组质粒。将设计、合成的3条靶向 GSK-3β基因编码区的 siRNA 及阴性对照分别克隆至 pSEB-G，构建 siRNA 表达载体 pSEB-si1-G、pSEB-si2-G、pSEB-si3-G 及 pSEB-siN-G。将 siRNA 表达载体瞬时转染 HepG2细胞，通过绿色荧光信号、RT-PCR 和 Western blot 观察和检测其对 GSK-3β基因的抑制效果，MTT 实验和 caspase-3活性分析检测其对 HepG2细胞增殖和凋亡的影响。结果经双酶切及测序证实，所构建 siRNA 表达载体目的基因大小、序列与预期相符。瞬时转染 HepG2细胞后，其中的 pSEB-si1-G 能使细胞中绿色荧光信号明显减少，可显著抑制 GSK-3βmRNA 的表达及蛋白的合成，并使 HepG2细胞增殖明显降低，caspase-3活性显著升高。结论成功构建了靶向 GSK-3β基因的 siRNA 表达载体，沉默 GSK-3β能显著抑制 HepG2细胞的生长并诱导其发生凋亡。
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