期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
乙醇脱氢酶的克隆表达及酶活优化
黄飞；奚超群；黄艳花；陈建华；胡磊
关键词：醇脱氢酶, 粗糙脉孢菌, 克隆, 酶活优化
摘要：目的 构建表达重组粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶的工程菌,并对乙醇脱氢酶酶活测定条件进行优化,为氧化还原酶酶法催化在手性药物中间体合成中的应用提供指导.方法 采用 PCR技术,以粗糙脉孢菌基因组 DNA为模板,克隆得到粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶基因,连接到表达载体 pET-28a上,得到重组质粒 pET-ADH.将该重组质粒导入大肠杆菌 BL21中,并经培养、筛选、酶切、测序鉴定.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并测酶活力,同时对影响酶活的条件进行研究.结果 粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶活力较高,适反应介质为 Tris-HCl缓冲液,在 30 ~ 35℃、pH 7 ~ 8时酶活力较稳定,较适底物为 2-氯苯乙酮.结论 通过采用 PCR技术,成功克隆表达粗糙脉孢菌乙醇脱氢酶,并优化得到优酶活条件.
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