期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
靶向型辅助腺病毒的构建及其功能研究
杨月峰；李泽良；鲁茁壮；王华；肖凤君；张群伟；孙慧燕；王立生
关键词：辅助病毒, 白血病, 第三代腺病毒载体
摘要：目的构建一种新型辅助腺病毒，并用于靶向型第三代腺病毒载体的制备，提高其对造血细胞的感染效率。方法采用重叠 PCR 的方法合成含有不完全包装信号序列 A1-A4和 loxP 序列的 DNA 片段 SynES，替换穿梭质粒 pShuttle 中原有的包装信号序列，得到穿梭质粒pShuttle-SynES；将所得穿梭质粒与骨架质粒 Ad5/F11p 在大肠杆菌 BJ5183中同源重组，获得重组腺病毒质粒载体pAd5/F11p-HV，将其转染293细胞包装重组腺病毒 Ad5/F11p-HV。参照第三代腺病毒包装策略，利用 Ad5/F11p-HV包装获得携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的第三代腺病毒HD-Ad5/F11p-GFP；将其以不同的感染强度感染人白血病细胞系 K562、U937、Jurkat 和人脐带血 CD34+细胞后，采用荧光显微镜和流式细胞术检测 GFP 的表达。结果采用 DAN 片段 SynES 替换穿梭质粒 pShuttle 上的包装信号，获得新的穿梭质粒 pShuttle-SynES；进一步构建获得重组腺病毒质粒 pAd5/F11p-HV，并制备了辅助腺病毒 Ad5/F11p-HV。采用该辅助腺病毒包装 pC4HSU-GFP，获得了第三代腺病毒 HD-Ad5/F11p-GFP；CsCl 密度梯度离心分离 HD-Ad5/F11p-GFP 和 Ad5/F11p-HV，获得了高质量的 HD-Ad5/F11p-GFP。与对照病毒 HD-H14-GFP 相比， HD-Ad5/F11p-GFP 可明显提高对人白血病细胞 U937、Jurkat 和人脐带来源 CD34+细胞的感染效率。结论设计并构建了一种靶向性辅助腺病毒，并以此为基础成功制备了对造血细胞高效感染的第三代重组腺病毒。
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