期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
位点特异整合型微环DNA的构建及应用
刘浏；周在威；马晴雯
关键词：微环 DNA, LR 克隆酶, ΦC31 整合酶, 位点特异性整合
摘要：目的联合应用 LR 克隆酶和链霉菌噬菌体ΦC31整合酶系统，建立一种获得位点特异整合型微环 DNA 的方法，为该载体在转基因研究中的应用提供科学资料。方法应用分子克隆技术，在目的基因表达盒及链霉菌attB 位点两端接入λattR 和λattL 片段，随后插入ΦC31整合酶基因表达盒，构建可获得微环 DNA 的亲本质粒。该亲本质粒上的λattL 和λattR 序列可在 LR 克隆酶的催化下重组生成表达ΦC31整合酶的微质粒和含有目的基因表达盒及 attB 位点的微环 DNA。以限制性内切酶酶切、定性以及定量 PCR 分析其重组效率。并将未经纯化的 LR重组体系转染 HeLa 细胞，以流式细胞技术、克隆计数、ELISA 等方法检测其转染率、整合率及目的蛋白表达水平，并与传统质粒进行比较。结果 LR 克隆酶可有效催化亲本质粒的重组，重组率达80%以上。重组体系中的微环 DNA 和微质粒无需纯化即可成功转染 HeLa 细胞，且其转染率、整合率以及目的蛋白表达水平均高于传统质粒。结论建立了一种高效、快速获得位点特异整合型微环DNA 的方法。
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