期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
人CaMKKβ蛋白的原核表达、纯化及活性测定
刘亚晋；谭初兵；时丽丽；潘晓菲；徐为人
关键词：钙-钙调素依赖性蛋白激酶, 腺苷酸活化蛋白激酶, 色谱法, 亲和, CaM/Ca2+
摘要：目的对原核体系表达的 CaMKKβ蛋白体外活性进行探索，为针对 CaMKKβ、AMPK 药物研发提供科研基础。方法克隆人 CaMKKβ基因，建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ，将其转化入 E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内，在16℃、0.02 mmol/L IPTG 条件下诱导重组表达CaMKKβ蛋白，Ni-NTA 纯化6His-CaMKKβ蛋白，并利用 Glo?Max Assay 方法检测其活性。结果通过基因测序表明 pET28a-CaMKKβ质粒构建成功；重组人 CaMKKβ蛋白可溶性表达量较高，Ni-NTA 纯化6His-CaMKKβ蛋白纯度可达80%以上，活性检测结果表明，大肠杆菌体系内表达的人 CaMKKβ蛋白在 CaM/Ca2+存在与否情况下，酶活基本一致。结论成功构建原核表达载体 pET28a-CaMKKβ，实现重组人 CaMKKβ在原核体系内可溶性表达，活性测定表明原核体系内表达的 CaMKKβ自主酶活性较强，受 CaM/Ca2+影响较小。
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