期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
人OX40胞外区基因的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备
吕卫东；李俊鑫；刘绿艳；李欣；崔璐璐；万晓春
关键词：受体, OX40, 基因表达, 抗体, 单克隆
摘要：目的：制备抗人 OX40单克隆抗体，为进一步研究OX40/OX40L 通路以及针对该通路进行疾病干预、疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法 PCR扩增人 OX40胞外区的基因序列，将其构建到原核表达载体 pET-32a(+)中，利用大肠杆菌表达系统表达OX40胞外区蛋白，经 Ni 柱纯化后获得目的蛋白。以纯化的 OX40胞外区蛋白为免疫原免疫小鼠，采用常规方法进行细胞融合，通过 ELISA 和多次克隆化培养，筛选出分泌特异性鼠抗人 OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot 和免疫荧光检测抗体的效价及特异性。结果成功构建人 OX40原核表达质粒 pET-32a(+)-OX40，并在 BL21(DE3)中诱导表达，经 SDS-PAGE 和 Western blot 鉴定、Ni 柱纯化、透析后获得 OX40胞外区蛋白；以此纯化蛋白为免疫原，成功制备具有较强亲和力的单克隆抗体。结论克隆表达并纯化了人 OX40蛋白，成功制备针对该蛋白的高亲和力单克隆抗体，为进一步研究 OX40/OX40L的生物学功能奠定了实验基础。
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