期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立
孙一帆；杨全利；黄建芳；赵凤芝；向军俭
关键词：甲胎蛋白类, 抗体, 单克隆, 双抗体夹心 ELISA
摘要：目的：制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白（hAFP）单克隆抗体，初步建立双抗体夹心 ELISA 检测方法。方法通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗 hAFP单抗的杂交瘤细胞株；对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析；双抗体夹心 ELISA 法筛选佳配对抗体；初步建立DAS-ELISA 检测方法并检测血样，绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。结果共获得12株稳定分泌抗 hAFP 单抗的杂交瘤细胞株，其中 Ab 1~Ab 55株单抗的腹水效价均高于600万， Ab 5的效价高达3000万；特异性鉴定结果表明 Ab 1~Ab 5均能够特异识别天然 hAFP 分子，但 Ab 5与人血清白蛋白（HSA）存在较强交叉反应；抗体配对实验共筛选出5对（Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和 Ab 4/HRP-Ab 1）能够满足 hAFP 检测要求且无交叉反应的配对抗体，终确定 Ab 1+ Ab 3/HRP-Ab 2和 Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4为佳配对组合；利用佳配对抗体组合建立标准检测曲线，其线性检测范围为5~250 ng/ml，低检测限2 ng/ml，检测上限400 ng/ml，优于进口试剂盒的线性范围5~200 ng/ml 和低检测限5 ng/ml；样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率99.2%（119/120例），阴性血清准确率100%（40/40例）。结论筛选获得的4株高亲和力、高特异性抗 hAFP 单抗均可应用于 DAS-ELISA 试剂盒的研制，Ab 1和 Ab 3适合作为捕获抗体，Ab 2和 Ab 4适合作检测抗体；自制试剂盒的线性检测范围和低检测限均优于进口试剂盒，表明具有商用价值。
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