期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
首页>中国医药生物技术杂志
- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
人谷草转氨酶的基因改造及高效重组表达
王玉梅；徐超；刘艳；高尚先
关键词：谷草转氨酶, 重组表达, 基因改造, 密码子, 参考物质
摘要：目的构建人谷草转氨酶（AST）高效重组表达体系。方法优化编码人 AST的核苷酸密码子，合成人 AST新的基因，并将其克隆至 pRSF-Duet表达载体中，转化大肠杆菌 BL21，以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以 SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹鉴定蛋白的性质，对重组蛋白的活性及在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的 AST密码子在大肠杆菌中的使用频率均在10%以上；重组蛋白存在于上清和沉淀中，经表达优化，在 IPTG终浓度为2 mmol/L、25℃、150 r/min振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率，纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷草转氨酶，活性可达136000 U/L，且在含有蛋白酶抑制剂的血清中稳定存在。结论通过密码子优化，成功构建了重组 AST的高效表达系统，重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。
友情链接