期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用
罗睿；徐建；魏玉珍；李海龙；刘红宇；苏静；赵莉莉；张玉琴；余利岩
关键词：环 AMP 依赖性蛋白激酶类, 药物评价, 临床前, 抗结核药, 高通量筛选
摘要：目的建立以蛋白激酶 A 为靶点的抗结核药物高通量筛选模型，应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组 DNA 为模板，扩增目的基因片段 pknA，构建表达载体 pET43.1a-pknA，在大肠杆菌中克隆表达了重组 MTB PknA 蛋白；采用三步级联的反应方法，利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸到氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸这一反应大吸光值波长的变化，建立和优化蛋白激酶 A 抑制剂高通量药物筛选模型。结果成功构建了表达载体 pET43.1a-pknA；建立了稳定灵敏，可用于靶向结核分枝杆菌蛋白激酶 A 的抗结核药物高通量筛选模型；利用该模型对4000个微生物发酵液粗提物样品进行筛选，终得到21个抑制蛋白激酶 A 活性的阳性样品，阳性率0.53%；以耻垢分枝杆菌和海分枝杆菌为检定菌，平板纸片法检测阳性样品的抗分枝杆菌活性，然后对阳性样品的细胞毒性和酶活抑制特异性进行评价后，终得到8个阳性样品，其中 I10AA-02916、I09AA-02717、I09AB-02729、I08AB-00801这4个阳性样品酶活抑制特异性、抗菌活性均较好，且细胞毒性较低。结论建立了高稳定性的以蛋白激酶 A 为靶点的抗结核药物高通量筛选模型，应用该模型所得到的发酵液阳性样品值得进一步研究。
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