期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
人参SQE基因干扰载体的构建及转化
于彦婷；任丽；孙春玉；蒋世翠；王义；张美萍
关键词：人参, 基因, 药物载体, 皂苷类
摘要：目的 探讨SQE基因对人参皂苷合成的影响.方法 根据SQE基因保守区序列,分别设计合成其正反义片段引物行RT PCR扩增,扩增产物分别与pMD 18-T质粒连接后转化Ecoli DH5a,获得的pMD18-TSQE-S、pMD 18-TSQE-A重组质粒经双酶切后,将正反义片段与质粒pMHZ 112反向连接,转化E.coli DH5a,构建SQE基因RNAj双元表达载体pMHZ112-SQE.电击法将鉴定正确的重组质粒pMHZ112-SQE转化农杆菌GV3101感受态细胞,再利用农杆菌介导法转化人参愈伤组织,提取抗性人参愈伤组织细胞基因组DNA,进行PCR检测并计算抗性愈伤转化率;同时提取人参皂苷,采用HPLC方法检测抗性人参愈伤组织的皂苷含量.结果 结果显示总RNA较完整无降解,质量较好;RTPCR扩增产物正反义片段大小与预期一致;重组质粒pMD18-TSQE-S、pMD18-TSQE-A和pMHZ112-SQE分别经双酶切进行测序鉴定,结果表明目的 基因已插入重组质粒且连接方向正确.人参愈伤组织细胞基因组DNA的PCR检测结果显示1个菌落经2对引物扩增结果均呈阳性,证明构建的pMHZ112-SQE重组质粒已成功整合入植物基因组中,其抗性愈伤转化率为1%.转化pMHZ112-SQE重组质粒后,人参抗性愈伤组织中单体皂苷Rgl、Re、Rc含量明显下降,Rbl略有升高,实验组与对照组(转化空质粒)间Rgl、Re、Rbl、Rc的含量差异显著(均P < 0.05);而2组均未检测出Rb2和Rd.结论 成功构建了SQE基因RNAi双元表达载体,通过转化人参愈伤组织抑制SQE基因的表达,可以调控人参皂苷含量发生相应的改变.
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