期刊简介
本刊为中国医药生物技术协会会刊，是面向全国医药生物技术研发、应用、产业化、市场管理的综合性学术刊物，国内外公开发行（CN 11-5512/R，ISSN 1673-713X）。办刊宗旨是及时全面地反映我国医药生物技术研发成果和行业动态，积极推进医药生物技术研发及产业化发展。主要栏目有述评、论著、法规与标准、研发/质量管理与控制、产业/企业家论坛、会议纪要、综述、讲座、继续教育园地、争鸣园地等。欢迎踊跃投稿和订阅。
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- 杂志名称：中国医药生物技术杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中国医药生物技术协会
- 国际刊号：1673-713X
- 国内刊号：11-5512/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
MAP30全长基因的克隆及在巴斯德毕赤酵母中的高效表达研究
朱振洪；杨威威；葛立军；万海同
关键词：苦瓜, 核糖体蛋白质类, 毕赤酵母, 基因表达
摘要：目的 研究毕赤酵母中高效表达全长MAP30蛋白及其生物活性.方法 根据GeneBank公布的MAP30全序列设计特异性引物,以苦瓜基因组为模板,PCR扩增MAP30全长基因,将该基因插入pPIC9k载体中,经Sac I酶切线性化后,电转化至GS115细胞,再通过G418筛选,终获得了高拷贝重组GS115菌株.重组菌株在甲醇诱导下,SDS-PAGE分析表达的特异性条带,运用Pharmacia VDS图像分析软件进行条带密度扫描,得到各条带的扫描曲线图,计算出同一泳道目的 蛋白条带峰面积相对于整个曲线所占的百分比,即蛋白纯度,并根据蛋白纯度和上清蛋白总量(Lowry法)计算出发酵上清液中目标蛋白含量.纯化时首先用75%的饱和硫酸铵盐析,然后用Phenyl Sepharose 6 FF疏水层析,再用CM-sepharose FF阳离子层析.采用MTT法检测MAP30蛋白对人胃癌细胞株SGC7901的抑制作用.为验证重组MAP30蛋白结构的正确性,采用EDMAN降解法分析Ⅳ末端8个氨基酸.结果 重组菌株在甲醇诱导下,SDS-PAGE分析可见相对分子质量32 000的特异性条带,重组蛋白占上清液总蛋白的67%;发酵液经硫酸铵沉淀、疏水和阳离子交换层析后,目的 蛋白总回收率为32.4%.MTI法检测结果表明,重组MAP30蛋白具有明显的抑制人胃癌细胞SGC7901的活性,IC_(50)为30μg/ml.N端的8个氨基酸测序进一步证实与理论一致.结论 重组.MAP30蛋白在毕赤酵母中正确表达,表达产物具有抑制肿瘤细胞的活性.
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